本生阐述：操作步骤三组织切片染色

　　1、Giemsa工作液的配制： 按试剂(A): 试剂(B) =1:9配制Giemsa stain工作液，即取1份的Giemsa stain储存液(10×)加入到9份的磷酸盐缓冲液中，充分混匀，即为Giemsa stain工作液。配制后的Giemsa stain工作液为即用型试剂，不易保存，即用即配。

　　2、新鲜组织立即置于Regaud固定液固定2天，期间应更换1次固定液。

　　3、3%的重铬酸钾固定1天。

　　4、流水冲洗16个小时或过夜。

　　5、按照常规脱水、包埋。

　　6、切片，厚度约为5μm。

　　7、常规脱蜡至水。

　　8、蒸馏水清洗2次，每次约1min。

　　9、置于含有Giemsa stain工作液的染缸内，浸染18～24h。

　　10、蒸馏水稍微清洗。

　　11、0.1～0.5%的乙酸洗1～2min。

　　12、自来水稍冲洗。

　　13、用无水乙醇迅速脱水3次，每次5～10s。

　　14、二甲苯透明。

　　15、中性树脂封固。

　　染色结果：

　　细胞核蓝色至紫色

　　细胞质淡蓝色

　　嗜铬细胞胞质黄绿色

　　结缔组织淡红色

　　注意事项：

　　1、 血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀，以免影响染色结果。

　　2、 涂片染色中Giemsa染色后，请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。

　　3、 如果染色过深或过浅，应调整染色时间或工作液的浓度。

　　4、 Giemsa涂片染色和组织切片染色中，pH值对染色有一定影响，载玻片应清洁无酸 碱污染以免影响染色结果。

　　5、染色液在稀释后液面应有金属光泽，表示染液有染色作用，否则染色液可能失效。 6、 Giemsa组织切片染色中，染色后需用大量0.1～0.5%的乙酸急速冲洗，避免浮面 沉淀 物污染切片后难以洗脱。

　　7、0.1～0.5%的冰乙酸分化，常用于Giemsa组织切片染色，如有必要亦可用于细胞涂片，但其浓度应适量下调。0.5%的冰乙酸分化切片时，切片呈粉红色即可终止。

　　8、Giemsa组织切片染色中，无水乙醇脱水要迅速，否则切片易褪色。

　　9、Giemsa涂片染色和组织切片染色中，如需急速获得结果，可以按Giemsa stain储存液：磷酸盐缓冲液(1×) =1：1配制，即取吉姆萨储存液(10×)1份、磷酸盐缓冲液(1×)1份，充分混匀，即为快速吉姆萨染色工作液，将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上，加热染色，20～30s后重新加染色液，反复5～10次，其余步骤同上。

　　10、染色液可重复使用，但不能多次重复，若有沉淀物应过滤后使用。

　　11、Regaud固定液：按3%重铬酸钾水溶液：甲醛=4:1配制，临用前混匀，1～2天后失效。

　　12、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 13、使用场所应通风，并远离火源。

　　有效期： 24个月有效甲基绿。

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