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　　大鼠I型前胶原羧基端肽(PICP)ELISA试剂盒的实验使用说明书如下：

　　BS-3496  大鼠I型前胶原羧基端肽(PICP)elisa试剂盒

　　1. ‌实验原理‌

　　本试剂盒采用双抗体夹心法测定样本中大鼠I型前胶原羧基端肽(PICP)的含量。首先用纯化的PICP抗体包被微孔板，形成固相抗体。随后加入样本或标准品，与HRP标记的PICP抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。洗涤后加入底物TMB显色，颜色的深浅与样本中PICP浓度呈正相关，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)并计算浓度‌。

　　2. ‌试剂盒组成‌

　　酶标板(预包被)：96孔

　　标准品：400ng/ml

　　酶标抗体工作液：12ml

　　标本稀释液：12ml

　　浓缩洗涤液：50ml

　　TMB底物：12ml

　　终止液：12ml

　　第一抗体工作液：12ml‌。

　　3. ‌样本处理‌

　　血清/血浆‌：采集后1000×g离心10分钟，分离上清液。

　　细胞培养上清液‌：3000转离心10分钟去除颗粒。

　　组织匀浆‌：加入生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清‌。

　　4. ‌实验步骤‌

　　加样‌：每孔加入标准品或待测样本100μl，37℃孵育120分钟‌。

　　洗涤‌：用洗涤液充分洗涤4-6次，滤纸印干‌。

　　加入第一抗体‌：每孔加入第一抗体工作液100μl，37℃孵育60分钟‌。

　　显色‌：每孔加入TMB底物100μl，避光孵育15-30分钟‌。

　　终止反应‌：每孔加入终止液50μl，立即测定OD值‌。

　　5. ‌结果计算‌

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线计算样本中PICP浓度‌。

　　6. ‌注意事项‌

　　试剂盒需在2-8℃保存，避免反复冻融‌。

　　实验过程中需使用不含热原和内毒素的试管‌。

　　显色反应需避光进行，终止后立即测定‌。

　　7. ‌检测范围与灵敏度‌

　　检测范围：1.25-80ng/mL

　　检测限：0.49ng/mL‌。

　　以上为大鼠I型前胶原羧基端肽(PICP)ELISA试剂盒的详细使用说明，适用于科研实验中的定量检测‌。