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大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒实验使用说明书.doc
发布时间:2025/3/25浏览:87次
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  大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒的实验使用说明书如下:

  1. 实验目的

  本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的含量‌。

  2. 实验原理

  采用双抗体夹心法测定标本中大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)水平。用纯化的大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,依次加入标本、标准品及HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后加底物TMB显色,TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度‌。

  3. 试剂盒组成

  封板膜:2片

  说明书:1份

  密封袋:1个

  标准品:2700ng/L,0.5ml×1瓶

  酶标包被板:1×48或1×96

  样品稀释液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  显色剂A液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  显色剂B液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  终止液:3ml×1瓶或6ml×1瓶

  浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶‌。

  4. 样本处理及要求

  血清‌:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分),收集上清‌。

  血浆‌:使用EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后离心,收集上清‌。

  尿液‌:无菌管收集,离心后取上清‌。

  细胞培养上清‌:检测分泌性成分时,直接收集上清;检测细胞内成分时,需反复冻融细胞悬液后离心‌。

  组织标本‌:切割后称重,加入PBS匀浆,离心后取上清‌。

  5. 实验步骤

  将标准品、标本依次加入包被微孔板中,温育并洗涤‌。

  加入HRP标记的检测抗体,温育并洗涤‌。

  加入底物TMB显色,反应终止后测定吸光度(OD值)‌。

  根据标准曲线计算样品浓度‌。

  6. 注意事项

  试剂盒需在-20℃保存,开封后酶标板需密封保存‌。

  标本采集后应尽快检测,避免反复冻融‌。

  实验操作需在相同环境条件下进行,以减少误差‌。

  7. 结果计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线,根据样品的OD值计算浓度,再乘以稀释倍数‌。

  以上为实验使用说明书的详细内容,供参考‌。

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