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大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)ELISA试剂盒的实验使用说明书如下:
1. 实验目的
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的含量。
2. 实验原理
采用双抗体夹心法测定标本中大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)水平。用纯化的大鼠巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,依次加入标本、标准品及HRP标记的检测抗体,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后加底物TMB显色,TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
3. 试剂盒组成
封板膜:2片
说明书:1份
密封袋:1个
标准品:2700ng/L,0.5ml×1瓶
酶标包被板:1×48或1×96
样品稀释液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
显色剂A液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
显色剂B液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
终止液:3ml×1瓶或6ml×1瓶
浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶。
4. 样本处理及要求
血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分),收集上清。
血浆:使用EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后离心,收集上清。
尿液:无菌管收集,离心后取上清。
细胞培养上清:检测分泌性成分时,直接收集上清;检测细胞内成分时,需反复冻融细胞悬液后离心。
组织标本:切割后称重,加入PBS匀浆,离心后取上清。
5. 实验步骤
将标准品、标本依次加入包被微孔板中,温育并洗涤。
加入HRP标记的检测抗体,温育并洗涤。
加入底物TMB显色,反应终止后测定吸光度(OD值)。
根据标准曲线计算样品浓度。
6. 注意事项
试剂盒需在-20℃保存,开封后酶标板需密封保存。
标本采集后应尽快检测,避免反复冻融。
实验操作需在相同环境条件下进行,以减少误差。
7. 结果计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标绘制标准曲线,根据样品的OD值计算浓度,再乘以稀释倍数。
以上为实验使用说明书的详细内容,供参考。