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以下是关于大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒的实验使用说明:
1. 试剂盒组成
标记物:HRP标记物。
样本类型:适用于大鼠血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
检测方法:双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
2. 样本处理
血清:使用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件下离心20分钟(2000-3000转/分),仔细收集上清。
血浆:选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件下离心20分钟(2000-3000转/分),收集上清。
细胞上清液:2-8℃条件下离心20分钟(2000-3000转/分),收集上清。
组织匀浆:称取1g组织,加入9g PBS(pH 7.2-7.4),匀浆后离心20分钟(2000-3000转/分),收集上清。
3. 实验步骤
加样:在各孔中加入标准品或样品各100μL,37℃孵育90分钟。
加入生物素化抗体:加入100μL生物素化抗体工作液,37℃孵育60分钟。
洗涤:洗涤3次。
加入酶结合物:加入100μL酶结合物工作液,37℃孵育30分钟。
洗涤:洗涤5次。
加入底物:加入90μL底物溶液,37℃孵育15分钟左右。
终止反应:加入50μL终止液,立即在450nm波长处测量OD值。
结果计算:根据标准曲线计算样本中PAL的浓度。
4. 注意事项
样本保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分保存。
试剂保存:试剂盒应按照说明书要求保存,避免反复冻融。
实验前预测定:正式测定之前,建议选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
5. 应用
用途:本试剂盒主要用于科研实验和课题研究,定量检测大鼠血清中的PAL浓度。
以上内容综合了多个来源的实验步骤和注意事项,确保实验的准确性和可重复性。