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二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)ELISA试剂盒的实验使用说明书可能因不同品牌、生产厂商而有所差异。以下是本生技术小编整理的一份通用的ELISA试剂盒使用说明,可以作为参考:
BS-0078-OA 二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)ELISA科研试剂盒(竞争法)96T/48T
BS-0078-OB 二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)ELISA科研试剂盒(竞争法)96T/48T
一、实验准备
试剂准备:
取出所需板孔数量,将未使用的板孔保存在密封袋中。
将各种试剂移至室温(一般为18~25℃或25~28℃)平衡至少30分钟,或按说明书要求操作。
样品准备:
根据实验需求准备样品,如细胞上清、血清、血浆等。
样品应清澈透明,如有悬浮物应通过离心去除。
避免使用溶血、高血脂或污染的样品。
二、实验步骤
加样:
分别设置标准品孔和待测样本孔。
按说明书要求向各孔中加入标准品或待测样本,轻轻晃动混匀。
覆上板贴,在温度(如37℃)下温育一定时间(如2小时)。
洗涤:
弃去孔内液体,甩干。
按说明书要求加入洗涤液,洗涤一定次数(如3~5次)。
每次洗涤后甩干,确保孔内无残留。
加生物素标记抗体:
向各孔中加入生物素标记抗体工作液,覆上新的板贴。
在温度下温育一定时间(如1小时)。
再次洗涤:
重复洗涤步骤,确保孔内无残留。
加辣根过氧化物酶标记亲和素:
向各孔中加入辣根过氧化物酶标记亲和素工作液,覆上新的板贴。
在温度下温育一定时间(如1小时)。
显色:
向各孔中加入底物溶液,在温度下避光显色一定时间(如15~30分钟)。
显色过程中注意观察颜色变化,确保反应充分。
终止反应:
向各孔中加入终止溶液,终止反应。
读板:
在反应终止后一定时间内(如5分钟内)用酶标仪在波长(如450nm)下测量各孔的光密度(OD值)。
三、结果分析
绘制标准曲线:
以标准品浓度为横坐标,对应的OD值为纵坐标,绘制标准曲线。
计算样品浓度:
根据样品的OD值和标准曲线,计算出样品的相应浓度。
四、注意事项
有效期和储存条件:
实验前需检查试剂盒的有效期和储存条件,确保试剂盒处于完好状态。
准确计算试剂体积和浓度:
使用前需要按照说明书准确计算试剂的体积和浓度。
佩戴防护用品:
操作时需佩戴手套,并保护眼睛和皮肤,避免接触到有害物质。
避免交叉污染:
在试验中使用一次性试管、枪头、封板膜及洁净塑料容器,避免交叉污染。
不同批号试剂盒组份不能混用:
不同批号的试剂盒组份不能混用(洗涤液和反应终止液除外)。
请注意,以上说明书仅供参考,具体实验操作应严格按照所购买DMAPP ELISA试剂盒的说明书进行。如有任何疑问或不确定之处,请咨询试剂盒生产厂商或专业人士。