本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒

　　以下是小鼠钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒的实验使用说明书：

　　一、试剂盒概述

　　‌用途‌：用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中小鼠钙调磷酸酶(CaN)的含量。

　　‌产地与品牌‌：不同品牌的试剂盒可能产自不同地方，例如天津本生或天正信达生物。

　　BS-9284小鼠钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒

　　‌包装规格‌：通常有48T和96T两种规格。

　　‌保存条件‌：2~8℃保存。

　　‌有效期‌：一般为6个月，具体以说明书为准。

　　二、实验原理

　　试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠钙调磷酸酶(CaN)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠钙调磷酸酶(CaN)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。

　　三、样本处理及要求

　　‌血清‌：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　‌血浆‌：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2~8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　‌组织匀浆‌：用预冷的PBS(0.01M，pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

　　‌细胞培养物上清或其它生物标本‌：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

　　四、试剂盒组成

　　试剂盒通常包含以下组件(具体以说明书为准)：

　　微孔酶标板

　　标准品

　　样本稀释液

　　检测抗体-HRP

　　20×洗涤缓冲液

　　底物A、B

　　终止液

　　封板膜

　　说明书

　　自封袋

　　其他可能包含的配件(如空白稀释板、橡胶手套等)

　　五、操作步骤

　　从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

　　设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

　　样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

　　除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。

　　弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。

　　每孔加入终止液50μL，混匀后在30分钟内用酶标仪在450nm处测定各孔的OD值。

　　六、注意事项

　　所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

　　以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。

　　在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。

　　洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，37℃水浴使结晶溶解后再配制洗涤液。

　　检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中2个月内用完。

　　试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

　　仅用于科研，不能用于临床诊断。

　　请按照试剂盒说明书进行操作，以确保实验结果的准确性。不同品牌的试剂盒在具体操作步骤和试剂组成上可能有所差异，因此在使用前务必仔细阅读并遵循相应品牌的说明书。