鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒实验使用说明书 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒

　　鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒试验原理：

　　英文名称：Chicken Interleukin 9,IL-9 ELISA试剂盒

　　本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。

　　试剂盒内容及其配制：

　　试剂盒成份96孔配置48孔配置

　　96/48人份酶标板1块板(96T)半块(48T)

　　塑料膜板盖1块半块

　　标准品1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)

　　空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)

　　标准品稀释缓冲液1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)

　　生物素标记抗体1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)

　　亲和链酶素-HRP1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)

　　洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)

　　底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)

　　底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)

　　终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)

　　自备材料：

　　1. 蒸馏水。

　　2. 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。

　　3. 振荡器及磁力搅拌器等。

　　鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

　　1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

　　3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟除颗粒和聚合物。

　　4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

　　5、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

　　操作注意事项：

　　l 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

　　l 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

　　l 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

　　l 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

　　l 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　l 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

　　l 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

　　按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

　　安全性：

　　1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

　　2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

　　3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

　　鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒试剂盒性能：

　　1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

　　2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

　　3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

　　操作步骤：

　　1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

　　4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

　　8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　鸡白介素9(IL-9)ELISA试剂盒结 果 判 断 与分析：

　　1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

　　2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的指标标准品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线，样品的含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度, 再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。