影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法，有哪些?

　　ELISA是什么?

　　ELISA是酶联免疫吸附测定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 的简称。它是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术 。

　　酶联免疫吸附试验的标准程序，通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上，再加入一级检测抗体(primarydetection Ab)，形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了，即可用来直接测定抗原的量，若无，则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate)，作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系，依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。

　　ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简略等优点，但是在详细实验过程中影响要素较多，而且要按照严厉的阐明要求，在临床检验中除正常反响外，有时常可见到一些错误成果(即假阳性或假阴性成果)。

　　影响ELISA测定错误成果的原因主要有：

　　①标本要素;

　　②试剂要素;

　　③操作要素。

　　一、类风湿因子

　　人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合，然后导致假阳性。

　　解决办法:

　　1.用F(ab)2替代完好的IgG;

　　2.标本用联有热变性(63℃，10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用);

　　3.检测抗原时，能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。

　　二、补体

　　ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中，抗体分子发作变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 能够将二者连接起来，然后形成假阳性。

　　解决办法:

　　1.用EDTA稀释标本;

　　2.用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。

　　三、嗜异性抗体

　　人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig(s) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能形成假阳性。

　　解决办法:

　　可在标本稀释液中加入过量的动物Ig(s)，但加入量不足或亚类不同时无效。

　　四、嗜靶抗原的本身抗体

　　抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。

　　解决办法:

　　测定前需用理化方法将其解离后再测定。

　　本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。