碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)试剂盒标本的采集与保存

　　1. 血清：

　　将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

　　2. 血浆：

　　用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

　　3. 组织匀浆：

　　1) 取适量组织块，于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液，称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);

　　2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2 次)。

　　3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。

　　4. 细胞裂解液：

　　1)贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);

　　2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;

　　3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞，再反复冻融)：

　　i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。

　　ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。

　　4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。

　　5. 细胞培养上清或其它生物标本：

　　请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

　　注意：

　　1. 以上标本均需密封保存，4oC保存应小于1周，-20oC不应超过1个月，-80oC不应超过2个月。

　　2. 标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

　　3. 实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

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