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Elisa实验:ELISA不显色成白板怎么破?
在做ELISA实验中,相信大家或多或少难免会出现一些状况,就在上周五,本生小编就客户问题:ELISA实验,到显色步骤结束后,酶标板所有孔均无颜色。阳性对照不显色。BUNSEN本生技术小编就此问题分析如下:
分析原因:试剂已过有效期,或不同试剂盒组分混用,检查试剂的组分及批号,确认未过期以及所有组分均属对应的试剂盒。
对策:不同试剂盒或不同批号的试剂不能混用。
整板的黄板现象可能是由于错加其他试剂造成,如同时操作两对半试剂时,测HbsAb板用于测HBsAg等;实验检查试剂的组分及批号,确认所有组分均属于对应的试剂盒。如盛标本的试管四周常有血痂,易脱落,应远离酶标板。
elisa试剂盒超过有效期的产品可能会产生很弱的信号;试剂盒没有按规定进行留存,受高温影响;实验检查试剂的组分及批号,确认试剂未过期。孵育温度应控制在37-38℃,孵育时间严格按照说明书操作,保温期内不宜多开门,以免影响保温。花板,一般是由于临床标本的收集、处理和留存方法不当造成,放置时间(自然放置1~2h)及离心转(3000r/min)、离心时间(15min)应引起注意。
试剂、样品用未平衡至室温从低温冰箱中取出的试剂及样品应置室温平衡,20分钟左右。错加、漏加试剂底物、显色剂A或B严格按说明书的步骤操作,加完试剂后可观察一下液面高度是否一致,以减少漏加现象。实验结束后,阴阳性对照正常,质控正常,但临床标本感觉显色较弱,待测标本中可能不含强阳性标本,故结果可能是正常的,如有怀疑,可复检标本加入叠氮钠作为防腐剂,酶免实验中的标本禁用叠氮钠作为防腐剂,可选用 proclin、硫柳汞等其他防腐剂,阴阳性对照正常,但质控、参考品或个别弱阳性标本未能检出。
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