产品快讯：过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒

　　规格：50T/48S

　　注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

　　产品内容：

　　提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存;

　　试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存;

　　试剂二：液体 0.33mL×2 瓶，4℃保存;用时每瓶加入5mL 试剂一;用不完的试剂4℃保存一周;

　　试剂三：液体 10 mL×1 瓶，4℃保存。

　　产品说明：

　　POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物， 在470nm有特征光吸收。

　　需自备的仪器和用品：

　　可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水

　　过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒操作步骤：

　　一、粗酶液提取：

　　1、 细菌、细胞或组织样品的制备：

　　细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次);8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

　　组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加入

　　1mL 提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

　　2、 血清(浆)样品：直接检测。二、测定步骤：

　　1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。

　　2、测定前将试剂一、二和三 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)放置10min。

　　3、样本测定表

　　试剂名称(µL)测定管

　　样本15

　　蒸馏水270

　　试剂一520

　　试剂二130

　　试剂三135

　　在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s 时的吸光值

　　A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA=A2-A1。

　　注意：

　　a.若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在 37℃(哺乳动物) 或 25℃(其它物种)放置10min 以上，测定时加入15µL 样本和1055µL 混合液测定。

　　b.如果ΔA 小于0.005，可将反应时间延长到5min。如果ΔA 大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。

　　三、POD 活性计算：

　　1、 血清(浆)POD 活性

　　单位定义：每mL血清(浆)在每mL 反应体系中每分钟A470 变化0.01 为一个酶活力单位。计算公式：POD(U/mL)=ΔA×V 反总÷V 样÷0.01÷T =7133×ΔA

　　2、 组织、细菌或细胞 POD 活性

　　(1)按样本蛋白浓度计算

　　单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

　　POD(U/mg prot)=ΔA×V反总÷(V样×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

　　(2)按样本鲜重计算

　　单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A470变化0.01为一个酶活力单位。

　　POD(U/g鲜重)=ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

　　(3)按细菌或细胞数量计算

　　单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟 A470 变化0.01为一个酶活力单位。

　　POD(U/104 cell)=ΔA×V反总÷(500×V样÷V 样总)÷0.01÷T=14.27×ΔA

　　V反总：反应体系总体积，1.07mL;V样：加入样本体积，0.015mL;V样总：加入提取液体积，1mL;T：反应时间，1min;Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL;W：样本鲜重，g;500：细菌或细胞总数，500万。

　　过氧化物酶试剂盒本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。